「胃溃疡」动物模子造备办法总结

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zaibaike
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胃溃疡(Gastric ulcer,GU)是指发作在胃幽门和贲门之间的慢性溃疡,属于消化性溃疡的一种,临床常见,发病率较高,治疗周期长,复发率高,对人们的生活量量影响庞大。

其发病机造次要为胃黏膜外表的“损伤因子”和“庇护因子”之间的失衡,招致胃酸和胃卵白酶排泄异常,胃消化液将胃黏膜消化从而招致黏膜下层组织损伤。此中幽门螺杆菌(HP)传染是次要的损伤因子,别的,应激形态、物理和化学刺激(胆汁反流、非甾体抗炎药、抽烟、酗酒等)同为损伤因素。

目前临床胃溃疡治疗常用抗酸药、量子泵按捺剂、H2受体阻断剂和抗菌药等药物停止干涉,但因其不良反响、复发率高档问题使得胃溃疡的治疗战略遭到限造。因而寻求一种对心理性胃酸排泄和机体菌群影响较小且平安高效的药物迫在眉睫。

动物尝试是研究疾病和寻找治疗药物的重要手段,因而,成立抱负的胃溃疡动物模子,对明白治疗办法及研发新药具有积极意义。

在动物身上复造人胃溃疡的办法有良多,所用办法差别,引起的溃变也各特点。接下来本文将详细论述各类胃溃疡动物造模办法,常用的造模办法有:

①应激法

通过各类强烈的危险性刺激(如强迫造动、饥饿和冰冷等),引起动物发作应激性溃疡。在模子复造过程中能够是单应激源,也可是多种应激源叠加。

其发作机造目前认为是在动物遭到应激源刺激后,交感神经系统兴奋增加,引起血管收缩,从而招致黏膜缺血缺氧,抵御力下降;同时副交感神经-垂体-肾上腺系统兴奋性升高,引起胃酸、胃卵白酶和胃泌素排泄增加从而引起应激性溃疡。

该模子可以较好地模仿人类生活中应激反响形态,造做过程简单易行,胜利率高,且在短期内可造模胜利,次要用在应激性胃黏膜损伤发作机造的研究以及其治疗药物的挑选等方面。

在浩瀚应激性溃疡动物尝试研究中,束缚浸水(restraint water-immersion stress,RWIS)模子应用最为普遍。其特点是溃疡水平与浸泡水温的凹凸和时间长短有关。

RWIS模子:选用200-250g大鼠,术前禁食24-48h,用乙醚麻醒后,将其四肢绑扎固定于鼠板上,待其清醒后垂曲浸入20-23℃的水中,水面平至大鼠的剑突,浸泡20-24h后,将动物处死、剖检。

造模所需尝试仪器简单,操做简便,易于察看,溃疡发作率高,常做为一种普遍利用的急性应激性胃溃疡模子。但造模过程中,应激强度的量化、详细应激反响水平和分期的掌握都很困难,难以在差别造模办法之间成立评判尺度。

②药物法

给动物打针或服用必然量的组织胺、胃泌素、肾上腺类固醇、水杨酸盐、血清素、利血平、保泰松等可形成动物胃肠溃疡。

如,组胺性溃疡模子:选用大鼠或豚鼠,禁食24h(能够饮水)后,腹部皮下打针磷酸组胺50 mg/kg,2h后再打针1次,3h后处死动物。此法也可诱发食管、胃、十二指肠等发作溃疡,是研究溃疡发作机造及治疗药物的常用模子。

水杨酸溃疡模子:选用大鼠,适应性饲养7天后,禁食24h后,把水杨酸按100mg/kg灌胃,4h后处死。溃疡水平与灌胃水杨酸的浓度有关,办法简便易行。

药物造模所构成的溃疡病变较表浅,多发作在腺胃部,数量少、体积小而浅表,仅累及黏膜上皮层,部门深达黏膜腺体,但不超越肌层,但病变较表浅,严酷地说仍然属于胃粘膜急性出血性腐败,与人类胃溃疡的典型病变差距较大,适于做摸索抗溃疡病药物研究和胃溃疡发病学方面的研究。

③乙醇法

乙醇引起胃溃疡的机造次要为损伤因子增加与防御因子削弱,其有多种路子诱导:自在基产生增加;胃黏膜脂量过氧化物产生增加;激活胃肠道的肥大细胞使其释放组胺、血小板活性因子、内皮素、白三烯及各类超氧化物;增加胃酸排泄和五肽胃泌素峰值;胃黏膜屏障受损;黏膜巯基物量含量削减;胃黏膜微轮回障碍;胃黏膜疏水性及外表活性磷脂含量降低。

由乙醇形成的胃溃疡在临床上的病例较多,其所引起的胃溃疡水平按照乙醇浓度、感化时间的差别而差别。

动物适应性饲养7天后,禁食不由水饲养48h,灌胃无水乙醇5ml/kg,1h后处死剖腹。

无水乙醇的侵蚀性很强,间接毁坏了胃黏膜屏障,引起胃黏膜明显损伤,构成溃疡在腺胃部沿血管走行散布,外表笼盖凝血,呈条索状。该模子的溃疡外形、组织学特点、愈合和复发过程与人胃黏膜损伤类似,其造做便利,反复性好,已成为最常用的尝试模子之一,但有必然的动物灭亡率。

④醋酸法(醋酸浸渍性慢性胃溃疡模子)

大鼠禁食不由水24h,全麻后,停止无菌手术,将腹部剖开,自肝后找出胃,用浓醋酸给大鼠胃壁内打针或涂抹于胃壁浆膜面上可形成慢性溃疡。

①胃黏膜打针法:用微量打针器吸收20-100%醋酸溶液0.01-0.05ml,经胃窦前壁透过肌层打针于胃黏膜。

②胃浆膜浸蚀:在胃前壁浆膜面窦体交结处,用浸有100%醋酸的较小的正方形滤纸接触统一部位(避开血管)2次,每30s。

醋酸诱导大鼠胃溃疡模子办法可靠,反复性好,溃疡明显,与人类的慢性胃溃疡极为类似,在挑选治疗慢性溃疡药物、察看药物治疗效果方面应用普遍,是尝试研究中较常用的造模办法。

但不敷之处是此法要求在全麻下手术操做,建模过程对尝试操做者的外科技能要求较高,易发作传染、出血等并发症,且模子成立需时较长,倒霉于停止大样本尝试。接纳醋酸灌胃法复造,可在必然水平上填补醋酸浸渍性胃溃疡动物模子的不敷。

⑤幽门结扎法

幽门结扎后,可刺激胃液排泄并使高酸度胃液在胃中潴留,形成胃溃疡。那类溃疡复造办法简单,发作快,胜利率高。

选用大鼠、小鼠或豚鼠,麻醒后,无菌前提下在剑突下由腹正中切开腹壁皮肤及肌层,暗语长约3cm,表露部,沿胃向右,找到幽门和十二指肠的联合处,避开血管,于其下穿线,将幽门完全结扎,封闭腹部,缝合和常规赐与抗生素。术后绝对禁食禁水,18h后处死。

幽门结扎是造做大鼠胃溃疡模子的传统典范办法,胜利率高、办法可靠、反复性好。但是零丁幽门结扎致溃疡感化较暖和,若共同其他刺激,则病变动典型。

其他

①腺胃炙烤法:溃疡部位可由本身选择。大鼠禁食不由水24h,麻醒后,无菌剖腹,以3mm粗的15 W电烙铁加热至45℃摆布,在胃壁或黏膜面间接灼烙约5s,即可见灼伤处呈现通明样白斑,稍待,黏膜即呈现水肿。6h后部分有明显出血,数天后,灼烙处的黏膜发作溃疡。

接纳腺胃浆膜外表间接灼烙法造备大鼠胃溃疡模子,其诱发的溃疡大而深,次要形态特征与人类慢性胃溃疡的根本类似,且尝试反复性好、造模胜利率高,溃疡发作率达100%。

②幽门螺杆菌(HP)传染法:幽门螺杆菌灌胃

Hp是引起胃炎的重要病原菌。当Hp传染未得到及时有效控造或Hp某些菌株的毒力十分强烈时,可招致消化性溃疡。

单纯幽门螺杆菌传染一般只会引起传染动物的胃黏膜炎症反响,很少形成黏膜的破损或溃疡,但幽门螺杆菌与溃疡愈合后的复发亲近相关。因而,目前多在动物溃疡模子的根底上使动物传染幽门螺杆菌,以成立幽门螺杆菌胃溃疡模子。

胃溃疡评价目标

取材

将大鼠处死,翻开腹腔,先结扎幽门,再用打针器将1%的福尔马林8-10ml从食管注入胃内,结扎贲门,在结扎线两头割断食道和十二指肠,取出全胃。

(1)肉眼察看及溃疡指数

察看胃窦溃疡大小,深浅,基底清洁度,有无笼盖白苔,四周黏膜色泽,弹性以及充血水肿情况。

30min后沿大弯剪开,外翻,倒去内容物,用水悄悄冲刷去胃内残渣,察看腺胃部黏液溃疡损伤水平,用溃疡指数停止评价。

溃疡长度>1mm者测其长度,每1mm计为1分,宽度>1mm者则计分加倍,若为小溃疡点计0.5分。将计分相加即为该动物的溃疡指数。

(2)病理查抄

HE染色:显微镜下查抄再生黏膜厚度、肉芽组织微血管数量、再生黏膜内呈囊状扩张的腺体数量、炎症细胞浸润情况。

HE染色成果显示,一般对照组胃粘膜及胃粘膜下层构造无病理变革,模子组粘膜损伤严峻,构造毁坏,大量炎性细胞浸润。

参考文献

1、Gastroprotective activity of polysaccharide from the fruiting body of Hericium erinaceus against acetic acid-induced gastric ulcer in rats and structure of one bioactive fraction,DOI:10.1016/j.ijbiomac.2022.04.153,IF: 8.025

2、All-in-One Theranostic Platform Based on Hollow Microcapsules for Intragastric-Targeting Antiulcer Drug Delivery, CT Imaging, and Synergistically Healing Gastric Ulcer , DOI:10.1002/smll.202104660,IF: 15.153

3、浅析胃溃疡动物模子及机理,廖承谱,2017

4、胃溃疡 动物模子研究停顿及评价,高蓉,2015

5、冰乙酸性大鼠胃溃疡模子造做及溃疡自愈过程中胃窦的组织学察看,孙凤蓬等,2001

6、人类疾病动物模子(第2版),刘恩岐主编,2014年

7、人类疾病动物模子复造办法学,周光兴等主编,2008

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