· 肿瘤成瘤模子
包罗皮下成瘤和原位成瘤,以Hep-G2细胞裸鼠成瘤为例,尝试步调和办法:
培育肿瘤细胞(Hep-G2细胞)
一般选择对数生持久肿瘤细胞停止移植,肿瘤细胞消化后需尽快接种到裸鼠皮下,取出裸鼠期间可将细胞悬液放置到水冰混合物上。
细胞接种量
若是欠好确定该肿瘤细胞接种量,可查找相关文献参考。皮下荷瘤细胞数量/体积可1-5*106/0.1 ml/打针点的范畴内选择。打针体积100 μL或200 μL均可,超越200 μL可能会漏液。
裸鼠的选择
裸鼠一般选择4-8周龄,体重18-20 g摆布,同批尝试鼠要包管个别差别小,同时按照尝试需求选择裸鼠性别。
裸鼠固定和麻醒
按照裸鼠体重腹腔打针麻醒药物,待进入恬静形态后,将其仰卧固定;
肿瘤细胞接种
按照皮下成瘤或原位成瘤选择打针部位,打针完成后迟缓退针,用PBS棉球行血。
注:皮下种植部位选择供血丰硕区域,如腋窝中后部、腹股沟中上部等。
继续培育
手术裸鼠放归培育前需赐与抗生素打针,同时做好伤口消毒。放归培育后留意察看裸鼠形态,制止手术刺激、目标组织丧失、传染等形成的灭亡。
处死裸鼠
颈椎离断,处死小鼠,剖解尸体,察看目的组织肿瘤生长情况,四周其他器官能否有转移瘤构成。所有可疑组织均做好标识表记标帜,摄影,如有外表结节,计数后,冻于液氮中。按照成果情况用10 %甲醛溶液固定留宿后做病理。
也可处死动物后取出目的组织,福尔马林中低温(-80 ℃)连结待测。
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