三种尝试动物模子

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zaibaike
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尝试动物的模子

手术模子

接纳外科手术的办法造做相关的疾病模子

诱导模子

接纳物理的,化学的、生物的和复合的致病因素,形成动物机体组织、器官或全身呈现类似人类疾病时功用、代谢或形态构造方面的改动。

基因润色模子

操纵生物化学办法导入外源性基因,删除或修改、原有基因,使得基因润色后的动物可用于研究人类疾病的病因、发病机造和治疗。

应用举例

一,手术模子

操纵手术,招致动物呈现机体损伤,研究其一系列的表示。

如大脑中动脉闭塞模子MCAO,坐骨神经慢性压迫损伤模子CCI,脊神经结扎模子SNL

例:

小鼠肝脏缺血再灌注损伤模子【动物造模】

建模办法

1小鼠术前12h禁食,自在饮水。

23%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔打针麻醒,麻醒胜利后将小鼠平躺在手术台上胶带固定四肢,将小鼠腹部术去毛,用碘酒和75%乙醇术区消毒。

3取腹正中暗语1cm,翻开腹腔,小心别离出肝脏左、中叶之肝蒂(左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉)。

4用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉,使约70%的肝脏缺血,以避免发作严峻肠系膜静脉淤血。0.5min后,与非阻断的右叶比拟,肉眼可见阻断叶明显变白,申明阻断胜利,用行血钳夹闭皮肤暗语临时封闭腹腔,同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。

5完成持续缺血60min后,从头翻开腹腔,敏捷取出血管夹,恢复缺血肝血流,0.5min摆布可见缺血区肝脏由白色逐步恢复为鲜红色表白再灌注胜利,逐层缝合腹腔肌肉和皮肤封闭腹腔,完成手术。待小鼠清醒后放回饲养室饲养,亲近存眷小鼠的形态及保存情况并做好记录。

6术后别离于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h麻醒小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。接纳全主动生化阐发仪检测血清中ALT(谷丙转氨酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)的程度。同时同一取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm留做病理标本或分生标本

二,诱导模子

接纳致病因素诱导,使动物呈现一系列的组织,器官,全身的机体改动,类似人类疾病时功用,代谢,形态构造改动。

如糖尿病模子,高血压模子,帕金森PD动物模子,阿尔兹海默AD动物模子等。

例:

成立肝癌动物模子

建模办法有

1用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌。选用成年封锁群大鼠,雌雄不限,赐与0.25%DEN水溶液0.25~1ml灌胃或稀释10倍,放在饮水瓶中自在饮水,剂量为每天2~10ml/kg,喂养半年摆布。

2用4-二甲基氨基偶氮苯(DBA)诱发大鼠肝癌。选用成年大鼠,用含0.06% DBA饲料喂养,饲猜中维生素B2不该超越1.5~2mg/kg,持续喂养4~6个月。

3用2-乙酰氨基酸(2AAF)诱发大鼠肝癌。给成年大鼠喂含0.03% 2AAF的饲料,每日每只均匀2~3 mg,持续3~4个月。

4 用亚氨基偶氮甲苯(OAAT)诱发大鼠肝癌。选用成年大鼠,用含1% OAAT苯溶液涂在大鼠的两胛间皮肤上,隔日1次,每次2~3滴,持续7~8周。

5用黄曲霉素诱发大鼠肝癌。饲猜中含0.001~0.015mg/kg混入饲猜中喂6个月。

三,基因润色模子

向动物体内导入外源基因或删除,修改原有基因,研究基因润色后动物,模仿人类基因遗传方面的病因,发病机造及治疗,还能够消弭种属差别。

如通过ES细胞囊胚打针或受精卵显微打针,实现转基因,基因敲除,基因点突变,基因敲入等基因润色目标。传统ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9,还有TetraOneTM 基因敲除新手艺。

例:

PD-1人源化小鼠的构建过程可简述为如下步调:

1构建包罗人源PD-1基因胞外卵白对应序列(包罗第二个外显子的全数序列和第三个外显子的部门序列)的打靶载体;

2将打靶载体转入小鼠ES细胞,经挑选标识表记标帜挑选出准确整合的ES细胞;

3将整合准确的ES细胞打针进八细胞期小鼠胚胎,得到嵌合体子代;

4嵌合体子代与C57BL/6N停止杂交,经布景纯化最末得到纯合的PD-1人源化小鼠模子。

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