结肠炎造模
一、DSS造模开展过程
目前有多种动物模子被普遍用于研究炎症性肠炎（inflammatory bowel disease，IBD）的病因、发病机造及测试新开发药物药效等，尤其以葡聚糖硫酸钠盐（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS MW:36000~50000）结肠炎（ulcerative colitis，UC）模子应用最广。
图1 DSS溃疡病结肠炎模子开展过程二、DSS 构建的UC模子特点
通过赐与动物自在饮用差别浓度的DSS（MW:36000~50000）水溶液，按照用药时间及用药周期可造成急性和慢性两种结肠炎模子。该模子症状表示与人类UC极为类似，次要表示为腹泻、黏液样便、粪便潜血、肉眼血便、重量减轻、活动度削减，毛色变差等。
三、 DSS UC模子的优势
1、症状表示与人UC极度类似，可用于研究急、慢性结肠炎的发作开展机造，也可用于药物的药效研究。
2、自在饮用DSS水溶液的建模体例，简单易行，成模率高，反复性强。
3、用差别浓度的DSS、给药时间和给药频次，能够实现急性和慢性两种结肠炎模子。模子持续时间长，表现了急性向慢性转化的动态过程，处理了UC的慢性化和维持问题，那是以前许多模子无法相比的。
4、多种属动物中均可造模：小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇等。
5、结合氧化偶氮甲烷 (azoxymethane, AOM)用药，可用于诱发结肠炎相关性癌症 (colitis associated cancer, CAC) 动物模子，胜利模仿IBD诱发CAC的过程。
四、DSS UC模子构建实例
1、小鼠造模
1）BALB/c小鼠，雌，6-8周，25 g；
2）用无菌水设置装备摆设3% DSS饮用水，然后用0.22 μm的滤膜过滤；
3）给小鼠持续饮用7天，HE染色；
4）尝试成果：小鼠的组织水肿充血，有明显的炎症现象。
图2 DSS急性结肠炎切片HE染色成果2、斑马鱼造模
1）将斑马鱼胚胎培育在含甲基蓝的E3胚胎培育基中，28.5 ℃，培育至1 dpf；
2）用E3培育基设置装备摆设0.5% DSS饮用水，然后用0.22 μm的滤膜过滤；
3）用0.5%的DSS处置斑马鱼，从3 dpf处置到6 dpf。
4）尝试成果：0.5%的DSS药物处置均会招致斑马鱼肝脏颜色变深，产生炎症应激。
图3 DSS招致斑马鱼肝脏产生炎症反响3、猪造模
1）四到五天大的约克郡小猪，尝试组：灌注DSS，对照组：灌注心理盐水
2）每只小猪每日摄入量1.25g DSS/kg，灌注5天
3）尝试成果：灌注DSS后，尝试组的血浆D-甘露醇摄取率显著高于对照组，表白小猪呈现了肉眼可见的肠炎症状。
图4 DSS诱招致小猪体内D-甘露醇浓度高于对照组4、果蝇造模
1）将5~10日的雌果蝇放在一个拆有2.5×2.5×1cm的空小瓶中培育中，用5%蔗糖溶液润湿的3.75-cm色谱纸（Fisher）进料介量；
2）用5%的蔗糖溶液别离配造含有差别成分的喂食培育基，类别包罗各含3%的DSS，25 μg/ml博来霉素；
3）果蝇放入含有层析纸的瓶中，29℃培育三天，期间每天将存活的果蝇移入含有新颖培育基的空瓶中；
4）尝试成果：DSS有致死的功用，且DSS诱导ISC前体细胞增殖。
图5 DSS诱导果蝇中ISC前体细胞增殖五、若何评价造模能否胜利？
1、疾病活泼指数评分（Disease Activity Index, DAI score）
从三个方面停止评估打分，别离为体重、粪便稀薄度、粪便潜血等目标，DAI评分为三个目标之和。
2、组织学变革评分
组织学变革评分为上述各目标之和，在急性结肠炎模子中淋凑趣构成不做评分。组织学阐发的尺度办法为HE染色（Cat.NO：60524ES60）。
3、结肠长度
急性结肠炎模子中，第8天可检测到结肠长度缩短；慢性结肠炎模子中，结肠长度缩短愈加明显。
4、总结
DSS UC动物模子构建应先辈行预尝试，试探建模前提，建议预尝试每组样本8-10只，并设立对照组。凡是呈现体重减轻、稀便、腹泻、血便或粪便潜血、溃疡可视为DSS药物有效，造模胜利。
六、翌圣DSS建模案例
翌圣DSS（Cat.NO：60316ES，MW:36000~50000）普遍应用于UC模子的构建。我们发现急性结肠炎成模时间次要集中在7天摆布，效果非常显著。下表是部门客户的数据反应。
产物特点：
1、症状与人类UC高度类似：可用于研究结肠炎发作机造和药效研究。
2、成模率高：自在饮用DSS水溶液，简单易行、反复性强。
3、可构建多种结肠炎模子：急性结肠炎、慢性结肠炎，还能够结合AOM构建结肠炎相关性癌症（CAC）模子。
4、适用于多种属动物造模：小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇等。
5、平安性高：DSS可被天然生态系统降解，对情况平安；
6、纯度高：高纯度（98%），硫含量17-19%；
七、常见问题
无论急性DSS结肠炎模子仍是慢性DSS结肠炎模子，肠炎严峻水平与胜利与否均与小鼠种属（差别基因布景）、DSS浓度、给药周期等相关。
八、产物订购
热卖产物，建模效率与进口产物一致，产物价格低至进口价格的1/3，大量现货库存。
产物链接：60316
动物急性胰腺炎造模
雨蛙素（Caerulein）是一种功用和构成上类似于胆囊收缩素（cholecystokinin，CCK）的胃调理分子，可以刺激胃、胆管和胰腺排泄。雨蛙素可用于研究由NF-κB上调卵白如细胞间黏附分子（ICAM-1），炎症相关因子如NADPH氧化酶以及Janus激酶介导的信号转导路子。并已经胜利运用于大鼠、小鼠、狗和叙利亚仓鼠等动物急性胰腺炎（AP）模子的成立。
造模优势：
1、操做简单
2、成本较低
3、造模敏捷
4、给药体例多
造模机造：
1、通过刺激胞内NF-KB来上调胰腺腺泡细胞内的细胞间黏附分子（ICAM-1）表达。外表ICAM-1反过来促进中性粒细胞粘附到腺泡细胞上从而加强胰腺炎症效应；
2、通过诱使消化酶排泄失调和细胞量空泡化招致腺泡细胞灭亡和胰腺水肿，从而诱导胰腺炎；
3、活化炎症促进因子。
相关试剂
翌圣供给十肽分子形式，纯度≥97% (HPLC)雨蛙素；造模效率高，价格优惠，现货供给。
产物超链：60321
糖尿病疾病模子造模
链脲佐菌素（Streptozocin，STZ）是从某种链霉菌Aureobasidium pullulans中产生的抗肿瘤类抗生素，也可人工合成。常被用于治疗胰腺癌。同时，STZ对必然种属动物的胰岛β细胞有选择性毁坏感化，能诱发许多动物产生糖尿病，一般接纳大鼠和小鼠造造动物模子。在抗白血病、DNA甲基化、抗肾炎等方面被普遍研究。
一、STZ诱导糖尿病模子的构建尺度SOP
1、动物的筹办
尽量选用雄性动物，雌性含有激素影响建模效率。有研究显示，雌性动物成模率差，并且可能会比雄性呈现更高灭亡率，尤其是I型。
I型糖尿病（Type I diabetes）一般根据体重选择即可，保举大鼠170-200g，小鼠17-22g，适应性喂养1~2周后空腹打针STZ，成模率相对抱负。
II型糖尿病（Type II diabetes）关于大鼠（好比SD/Wistar），拔取4-5周龄，体重在90-100g，高脂（高糖）饲料喂养4-6周体重约达240-280g。 关于小鼠（好比C57/ICR/昆明小鼠），拔取4-5周龄，体重在16-20g，高脂（高糖）饲料喂养4-6周体重约达30-35g。 关于新购入动物或改换饲养情况需要先用通俗饲料适应性喂养一周，然后再选择合适周龄/体重动物转用高脂高糖饲料继续喂养。从模子成立胜利率来看，大鼠保举用SD，小鼠保举C57。
2、造模前的喂养
造膜前的喂养，Ⅰ型糖尿病模子成模比力快，凡是大鼠在通俗饲料适应性喂养2周后即可起头造模；Ⅱ型糖尿病模子：高脂饮食诱导加小剂量STZ。造模前喂以高脂(高糖)饲料，诱发出胰岛素抵御。
3、试剂的筹办
①高脂(高糖)饲料
高脂(高糖)饲料成分：此中含10%蔗糖，10%猪油，5%胆固醇
由根底鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按量量比搭配造做高脂高糖饲料：其比例为猪油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黄3 % ,根底饲料59 %。
②STZ溶剂——柠檬酸钠缓冲液的配造
A液和B液的配造：称取柠檬酸(FW:210.14) 2.1g参加双蒸水100mL中配成A液；称取柠檬酸钠(FW:294.10) 2.94g参加双蒸水100mL中配成B液。
柠檬酸钠缓冲液的配造：将A、B液按必然比例混合（1：1.32也有按1:1的），pH计测定pH值，调理pH值到4.2-4.5，便是所需柠檬酸钠缓冲液。
4、打针前筹办
配造STZ打针液前，STZ冻干粉放置于枯燥灭菌瓶内，外用铝箔纸或锡纸包好，与柠檬酸钠缓冲液一路置于冰浴预冷，带到动物房备用。
留意：STZ冻干粉从−20°C冰箱取出后，于室温枯燥避光放置10min摆布，使其彻底解冻（很重要）。
5、配造打针液
大鼠留宿禁食（不由水）后称重并测血糖浓度。对大鼠停止分组，以便根据动物数目和打针剂量来筹办STZ打针液。以1%浓度（w/V）消融STZ，过滤消毒，切记STZ完全消融。
留意：
①STZ不不变，易失活，快速称取后剩余试剂仍要求枯燥避光，保举用枯燥铝箔(或锡箔)纸包裹。
②打针时若操做不纯熟，切忌不成一次性消融完STZ。建议按照操做纯熟度，分组消融STZ，好比10只或15只鼠/组。
③亦可提早将STZ按动物分组的所需量称重，分拆。
6、打针
按动物空腹体重腹腔或尾静脉打针。若是打针操做手艺不纯熟，应两组瓜代打针，打针应在30分钟内完毕。留意：打针大多要求快速打针。
留意：
Ⅰ型糖尿病模子：大鼠剂量为70～65mg/kg
Ⅱ型糖尿病模子：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/kg。
7、打针后
打针完STZ后要赐与动物足够的水、食物（糖尿病鼠的根本生活特征），需每日换垫料，连结鼠笼枯燥。饲养时，留意制止强日光照射。尽可能勤消毒。
留意：STZ造模后，明显血糖程度颠簸呈现3个时相，一时性高血糖（1-2h）、短暂低血糖（6-10h）、持续高血糖（>72h）。必需恰当补给胰岛素和葡萄糖。
二、 STZ诱导糖尿病模子建模效果评估目标
与对照组比照，统计以下目标：
1、一般性目标：呈现多饮、多食、多尿现象，体重下降；
2、其他目标：空腹血糖、空腹血清胰岛素程度、血清胰岛素程度、胰岛素敏感性、糖耐量等；
3、血清生化目标：T-Cho、TG、HDL-C、LDL-C、CR、BUN、Alt等。
4、病理切片：胰腺组织病理切片
三、STZ诱导糖尿病模子的失败原因解析
1、STZ的品量是关键，建模用STZ纯度应不低于98%（HPLC检测）。
2、STZ失效：应枯燥保留，制止受潮。粉末制止长时间室温放置，消融的STZ长短常不不变的，在中性pH值的半衰期为15分钟。留意用酸性pH值消融STZ，更好放在冰浴里。
3、腹腔打针能否打针到肠子等脏器。
模子不达标者，建议，再察看3天，仍是不成模子的话，从头打针一次。
四、STZ诱导小/大鼠灭亡率高的原因解析
1、鼠的体重过低；
2、 必然要包管足够的饮水量(饮水量不敷容易招致死鼠);
3、高血糖和低血糖城市形成死鼠，制止死鼠能够通过打针胰岛素或暂时补糖，两种路子： ①常见为血糖过高。补胰岛素法，补一些中效胰岛素。例如给诺和灵n或NPH(中性鱼精卵白锌胰岛素),每次2-3个单元，过了3-5天，大鼠一般灭亡率就低了；②补糖法，禁食后的鼠，打针的时候已经处于低血糖形态，造模4小时后腹腔打针20%的葡萄糖，可制止因打针时血糖过低死鼠；
4、避免动物自相残杀。食物缺乏和供水不敷的情况下，会互相撕杀、啃食同类，所以食物和饮水要供给充沛，更好是两路供给;
5、避免传染。糖尿病大鼠尿量多，垫料湿润，需要勤换垫料，所以糖尿病大鼠较其他大鼠容易呈现传染，出格是泌尿道传染和腹腔传染。腹腔打针、皮下打针及采血测血糖等侵入性操做前后，要留意消毒工做。如每次采血测血糖后可用四环素(或金霉素眼药膏)部分涂抹处置伤口预防传染。
五、糖尿病建模的影响因素
糖尿病疾病模子的影响因素包罗STZ建模试剂的量量、动物情况及给药体例等。此中，试剂次要性能为纯度、不变性、消融特征等，动物情况次要包罗遗传布景，雌雄，性别，体重，饲养情况，饮食构造等，给药体例包罗给药时间、给药间隔和给药路子。差别化的因素带来差别化的建模效果。
六、STZ建模办法思绪梳理
影响因素尺度化是实现建模目标及建模不变性的包管。理论上，所有的动物建模尝试均要求预尝试。
以STZ诱导糖尿病模子而言，尝试时STZ的给药量应参照预尝试的成果，尽量不要自觉根据文献上或别人的给药量来间接利用，鼠均重和空腹(低糖形态)抗药力、禁食时长、打针选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不不异，通过预尝试来确定契合本身尝试鼠的给药计量，才是最科学的。
七、高建模胜利率STZ利用指南
STZ保留、消融、分拆等利用留意事项，详见官网相关试剂
八、翌圣产物
高胜利率：纯度≥98%（HPLC测定）；量量不变，性价比高，现货供给，售后保障。
产物超链：60256